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SGC-7901/VCR細胞@ATCC菌株原裝進口@SGC-7901/VCR細胞

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SGC-7901/VCR細胞@ATCC菌株原裝進口@SGC-7901/VCR細胞 【實驗Tips】細胞培養技術注意事項匯總:一、細胞的凍存:為避免污染造成的損失，*小化連續細胞系的遺傳改變和避免有限細胞系的老化和轉化，需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前，細胞應該特性化并檢查是否污染。

有幾種普通培養基用來凍存細胞。對于包含有血清的培養基，成分可能如下：

◆包含10%甘油的完全培養基，

◆包含10%二甲基亞砜(DMSO)的完全培養基，

◆50% 細胞條件培養基和50%含有10%甘油的新鮮培養基，或

◆50% 細胞條件培養基和50%含有10%二甲基亞砜的新鮮培養基。

對于無血清培養基，一些普通的培養基成分可能是：

◆50% 細胞條件無血清培養基和50%包含有7.5%二甲基亞砜的新鮮的無血清培養基，或

◆包含有7.5%二甲基亞砜和10%細胞培養級BSA的新鮮無血清培養基。

SGC-7901/VCR細胞@ATCC菌株原裝進口@SGC-7901/VCR細胞@【實驗Tips】細胞培養技術注意事項匯總

1. 實驗進行前，無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70 %ethanol 擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風扇運轉10 分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10 分鐘以上后，再進行下一個細胞株之操作。 2. 無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置，其它實驗用品用完即應移出，以利于氣流之流通。實驗用品以 70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在抬面之中央無菌區域，勿在邊緣之非無菌區域操作。 3. 小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。 4. 工作人員應注意自身之**，須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應特別小心操作，并選擇適當等級之無菌操作臺(至少 Class II)。操作過程中，應避免引起aerosol 之產生，小心毒**品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖銳針頭之傷害等。 5. 定期檢測下列項目： 5.1. CO2 鋼瓶之CO2壓力 5.2. CO2 培養箱之CO2濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水，每周更換)。 5.3. 無菌操作臺內之airflow 壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜，預濾網(300小時/預濾網，3000 小時/HEPA)。

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