關鍵詞:Western Blotting技術服務|實驗技術服務 簡介:世界**品牌Western Blotting技術服務|實驗技術服務原裝**,質量保證,價格優惠。 Western Blotting技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。 我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產品的同時,我們也會提供相應的原始數據和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面,我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。 產品品牌:Western Blotting技術服務|實驗技術服務 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html 測序實驗流程: 免疫蛋白質印跡(Western blotting)是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。寶賽生物為您提供全套的常規免疫印記技術服務,同時本公司采用先進的LICOR Odyssey雙色紅外激光成像系統和雙色熒光染料標記的二抗*新推出高靈敏度的紅外激光免疫印跡服務。與常規化學發光方法比較,靈敏度可達到皮克級(pg),還具有雙色成像、定量**、成像清晰的優點。同時具備功能強大的軟件系統,可快速判定樣品分子量大小并進行定量分析。 主要實驗步驟如下: 1. 蛋白質抽提 a.實驗對象為組織樣品,取適量(250~500mg)新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品,加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑(或核蛋白抽提試劑),勻漿后抽提總蛋白(或核蛋白)。 b.實驗對象為細胞樣品,每份樣品取1×106~1×107細胞,PBS清洗細胞,去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑(或核蛋白抽提試劑)抽提總蛋白(或核蛋白)。 2. 蛋白質定量 按KCTMBCA蛋白質定量試劑盒操作說明操作,測定樣品濃度。 3. 變性聚丙烯酰胺不連續凝膠電泳(SDS-PAGE) 將準備好的樣品液和生物素標記的蛋白質分子量標準分別上樣,標準加進**個孔中,電泳分離蛋白。 4. 蛋白質轉移到硝酸纖維膜或PVDF膜 按Bio-Rad蛋白轉移裝置說明組裝濾紙凝膠纖維素夾層,30mA恒流條件下,4°C轉移。 5. 膜的封閉和抗體孵育 a.膜在5%BSA溶液中室溫孵育1小時以封閉膜上的非特異結合。 b.封閉過的膜加入**抗體室溫孵育1.5小時,抗原抗體結合。 c.加入HRP標記的二級抗體以結合**抗體及HRP標記的抗生物素抗體以結合分子量標準,室溫孵育膜1小時。加入HRP標記的GAPDH抗體可同時檢測GAPDH含量。。 6. 結果檢測 化學發光法檢測,膜與化學發光底物孵育,經X膠片曝光顯影。圖片掃描保存為電腦文件,并用ImageJ分析軟件將圖片上每個特異條帶灰度值的數字化。 7. 數據分析 目的蛋白的灰度值除以內參GAPDF的灰度值以校正誤差,所得結果代表某樣品的目的蛋白相對含量。 8. 提供實驗報告 包括詳細的實驗方法及免疫印跡實驗結果的相關圖表.上一篇:Western Blotting服務|實驗技術服務下一篇:Western Blot服務|實驗技術服務
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