關鍵詞:基因表達和慢病毒構建包裝純化服務|實驗技術服務
簡介：世界**品牌基因表達和慢病毒構建包裝純化服務|實驗技術服務原裝**，質量保證,價格優惠。
基因表達和慢病毒構建包裝純化服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒，客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌：基因表達和慢病毒構建包裝純化服務|實驗技術服務   http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序實驗流程：
用DNA star5．01和Vector NTI Suite8．0軟件進行序列對比分析和進化樹構建。經雙酶切將HBx基因定向插入到pcDNA3．1（＋）質粒中。結果；成功克隆了基因型C型突變型HBx基因，并構建出真核表達載體pcDNA3．1（＋）HBx。新基因被GeneBank接受，在GeneBank上登錄號為AY839630。序列對比和進化樹分析表明．新克隆的基因與野生基因型C型有高度的同源性（97．80A），2．2％的變異。
從不同的重組DNA分子獲得的轉化子中鑒定出含有目的基因的轉化子即陽性克隆的過程就是篩選。目前發展起來的成熟篩選方法如下：
（一）插入失活法
外源DNA段插入到位于篩選標記基因（抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因）的多克隆位點后，會造成標記基因失活，表現出轉化子相應的抗生素抗性消失或轉化子顏色改變，通過這些可以初步鑒定出轉化子是重組子或非重組子。目前常用的是β-半乳糖苷酶顯色法即藍白篩選法。
（二）PCR篩選和限制酶酶切法
提取轉化子中的重組DNA分子作模板，根據目的基因已知的兩端序列設計特異引物，通過PCR技術篩選陽性克隆。PCR法篩選出的陽性克隆，用限制性內切酶酶切法進一步鑒定插入片段的大小。
（三）核酸分子雜交法
制備目的基因特異的核酸探針，通過核酸分子雜交法從眾多的轉化子中篩選目的克隆。目的基因特異的核酸探針可以是已獲得的部分目的基因片段,或目的基因表達蛋白的部分序列反推得到的一群寡聚核苷酸,或其它物種的同源基因。
（四）免疫學篩選法
獲得目的基因表達的蛋白抗體，就可以采用免疫學篩選法獲得目的基因克隆。這些抗體即可是從生物本身純化出目的基因表達蛋白抗體，也可從目的基因部分ORF片段克隆在表達載體中獲得表達蛋白的抗體。
奇妙的克隆克隆技術已展示出廣闊的應用前景，概括起來大致有以下四個方面：
（1）培育優良畜種和生產實驗動物；
（2）生產轉基因動物；
（3）生產人胚胎干細胞用于細胞和組織替代療法；
（4）復制瀕危的動物物種，保存和傳播動物物種資源。
表達策略：1 反向遺傳學：克隆的CDS可以亞克隆到特定的表達載體，并轉基因到特定的物種（如果本物種的轉基因體系尚未建立或很困難，可以先轉入一些模式生物），按需要在各種啟動子的驅動下在生物體內表達，觀察表型；同時可以根據該CDS序列，設計RNAi載體，轉基因，觀察表型。如果需要，可以克隆該基因本身的啟動子，然后讓其驅動該基因或RNAi片斷表達。
2 體外表達：可以利用大腸桿菌、酵母系統，在體外做一些原核或真核的表達。用以研究酶活，制備抗體等。
基因克隆過程:１、 獲得待克隆的DNA段（基因）；
２、 目的基因與載體在體外連接；
３、 重組DNA分子導入宿主細胞；
４、 篩選、鑒定陽性重組子；
５、 重組子的擴增與／或表達。
材料與方法
1.1　動物和細胞　BALB/c小鼠均為雌性, 5～8周齡,由本校動物中心提 供;小鼠骨髓瘤細胞SP2/0株(H-2d)和人肝癌細胞7721株由本室保存。
1.2　質粒和細菌　pBRTMHCV1-3011質粒［包含除5'非編碼區基因(NCR) 外全部HCV基因序列］,由美國Rice教授惠贈;pcDNA3真核表達載體和大腸桿菌菌種JM109由 本室保存;質粒制備、含HCV C基因的真核表達重組質粒的構建見文獻［2］。
1.3　主要試劑及工具酶　 HCV C抗原由**醫學科學院基礎所凌世淦教 授惠贈;脂質體(Lipofectamine)、酶標抗體及限制性內切酶、連接酶等均購自華美生物公司 。
1.4　細胞表達產物的鑒定　將重組質粒pcDNAHCV-C用Lipofectamine 轉染法分別轉染SP2/0細胞和7721細胞,72 h后收集細胞。SP2/0細胞涂片,以HCV C單抗為 一抗做免疫熒光檢測;7721細胞用超聲斷裂后,收集細胞懸液及上清,煮沸10 min,也以HC V C單抗為一抗,Western blot法檢測表達的蛋白。
1.5　小鼠免疫及血清抗體水平測定　重組質粒大量提取,PEG純化。48 只BALB/c小鼠股四頭肌注射 0.25%布比卡因100 μl,24 h后分兩組,在同一部位肌肉接種質 粒。第1組注射100 μg重組質粒pcDNAHCV-C或空載體對照pcDNA3,2 w后,將實驗鼠再分成 兩部分,一部分按以上方法每間隔2 w再次接種同量的DNA,共注射5次,另一部分不再接種; 第2組注射不同劑量50～200 μg的質粒DNA。不同劑量或不同注射次數組均設4只復鼠,小鼠 每次接種前24 h均需用0.25%布 比卡因100 μl預處理,兩組均每間隔2 w剪尾取血。鼠血清1:50稀釋后,ELISA法檢測HCV C 特異性抗體產生情況。