關鍵詞:流式分選實驗技術服務|實驗技術服務 簡介:世界**品牌流式分選實驗技術服務|實驗技術服務原裝**,質量保證,價格優惠。 流式分選實驗技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。 我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。 產品品牌:流式分選實驗技術服務|實驗技術服務 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html 測序實驗流程: 1 作用原理: 對實體組織分散的作用原理主要有3方面:① 可以破壞組織間的膠原纖維、彈性纖維等;②可以水解組織間的粘多糖等物質;③可以水解組織細胞間的緊密聯結裝置的蛋白質物質。酶消化法是實體瘤、培養細胞分散為單細胞的主要方法之一。常用的酶類試劑有:蛋白酶類——胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、鏈酶蛋白酶和中性蛋白酶等,都能解離組織中的細胞。胰蛋白酶能水解脂鍵和肽鍵;膠原酶能降解幾種分子類型的膠原;溶菌酶能水解糖蛋白和肽的糖苷鍵;彈性蛋白酶能消化連接組織的糖蛋白和彈性蛋白的纖維。不同酶對細胞內和細胞間不同組分有特異作用,可根據分散組織類型來確定使用的酶類。 2 注意事項: ① 酶需要溶解于適當的溶液中,而這些溶液不致于造成酶效價降低;②要注意酶的使用濃度和消化時間;③要注意酶活性的PH值。如胃蛋白酶在堿性環境中失去活性,胰蛋白酶在中性溶劑中活性不佳等;④ 要隨時注意影響酶活性的其它因素,如酶的生產批號等。 實驗方法 ① 將組織切成薄片,置入試管中; ② 首先加入EDTA液5ml,室溫下0.5h,離心棄之; ③ 再加入胰酶-EDTA液5ml。在37℃恒溫水浴振蕩器內30min; ④ 用300目尼龍網過濾,離心沉淀1000prm,5min。再以生理鹽水洗2-3次; ⑤ 細胞固定或低溫保存備用。 血小板標記方法 全血法單標測血小板CD62p、CD63、CD42b、CD41、CD61等指標。 染色方法步驟: (1) 采血枸櫞酸鹽或EDTA抗凝; (2) 10μl熒光標記抗體,加100μl PBS,再加5μl全血(樣品管); 10μl抗體同型對照,加100μl PBS,再加5μl全血(對照管); 輕輕混勻,室溫孵育15min; (3) 加2-3ml PBS(1% PFA)終止反應,上機檢測分析。 機械法分散實體組織包括:用手術剪刀剪碎或者用鋒利的解剖刀剁碎組織,用勻漿器勻漿,再用細注射針頭抽吸細胞或用300目尼龍網濾出單細胞懸液;采用搓網法也能獲得大量細胞。機械法易造成細胞碎片和細胞團塊,所以機械法常與其它方法配合使用。 1 剪碎法: ① 將組織塊放入平皿中,加入少量生理鹽水; ② 用剪刀將組織剪至勻漿狀; ③ 加入10ml生理鹽水; ④ 用吸管吸取組織勻漿,先以100目尼龍網過濾到試管中; ⑤ 離心沉淀1000prm,3-5min,再用生理鹽水洗3遍,每次以低速(500-800prm)短時離心沉淀去除細胞碎片; ⑥ 以300目尼龍網濾去細胞團塊; ⑦ 細胞用固定液固定或低溫保存備用。 2 網搓法 ① 將100目,300目尼龍網扎在小燒杯上; ② 把剪碎的的組織放在網上,以眼科鑷子輕輕搓組織塊,邊搓邊加生理鹽水沖洗,直到將組織搓完; ③ 收集細胞懸液,離心沉淀500-800prm,2分鐘; ④ 固定細胞或低溫保存備用。 3 研磨法 準備一只70ml研磨器。 ① 先將組織剪成1-2mm3大小組織塊; ② 放入組織研磨器中加入1-2ml生理鹽水; ③ 轉動研棒,研至勻漿; ④ 加入10ml生理鹽水,沖洗研磨器; ⑤ 收集細胞懸液,并經300目尼龍網過濾,離心沉淀500-800 prm,1-2 min,再以生理鹽水洗3 遍,離心沉淀; ⑥ 固定或低溫保存細胞懸液,備用。上一篇:流式分選實驗服務|實驗技術服務下一篇:流式細胞術|實驗技術服務
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