關鍵詞:侵襲小室實驗技術服務|實驗技術服務
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侵襲小室實驗技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒，客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
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測序實驗流程：
侵襲小室小室制備
① 包被基底膜：
用50mg/LMatrigel 1:8稀釋液包被Transwell小室底部膜的上室面，4℃風干。如果需要在下室面鋪FN的話，可將200ul槍頭的**剪掉,吸取FN均勻涂抹在小室的下面。用膠原（collagen）的話，一般配成0.5mg/ml，直接用槍吸了涂在膜上。
② 水化基底膜：
吸出培養板中殘余液體，每孔加入50ul含10g/LBSA的無血清培養液，37℃，30min。
另有tianjin_glioma戰友提供的方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀釋后的Matrigel (3.9ug/ul) 60-80µl (注意體積不可太大，以剛把聚碳酸酯膜浸濕為*好)，置37℃ 30min使Matrigel聚合成凝膠。
有基質膠的Transwell小室制備
Chemicon公司的ECM550系列說明書要求，將小室放入培養板中，在上室加入300µl預溫的無血清培養基，室溫下靜置15－30min，使基質膠再水化。再吸去剩余培養液。
制備細胞懸液
① 制備細胞懸液前可先讓細胞撤血清饑餓12－24h，進一步去除血清的影響。但這一步并不是必須的。
② 消化細胞，終止消化后離心棄去培養液，用PBS洗1－2遍，用含BSA的無血清培養基重懸。調整細胞密度至1－10×105。
具體實驗時采用密度要自己摸索，因為不同細胞，其侵襲能力是不同的。個人經驗，細胞量過多，穿過膜的細胞會過多過快，如果*后用計數法統計結果的話將難以計數；而過少的話，可能還沒到檢測的時間點，所有的細胞都已穿過，因此*少也要保證在收樣的時候，上室內還要有一定量的細胞存在。
個人認為，對照組和處理盡量不要分開計數，因為細胞數目的差異會嚴重影響實驗結果。如果需要對細胞預處理而不得不分開計數，那么計數一定要多重復幾次，力求準確，盡量保證對照組和處理組細胞密度一致。
接種細胞
① 取細胞懸液100－200µl加入Transwell小室，不同公司的、不同大小的Transwell小室對細胞懸液量有不同要求，請參考說明書。24孔板小室一般200µl。
② 24孔板下室一般加入500µl含FBS或趨化因子的培養基，不同的培養板加的量有不同要求，具體請參考說明書。這里要特別注意的是，下層培養液和小室間常會有氣泡產生，一旦產生氣泡，下層培養液的趨化作用就減弱甚至消失了，在種板的時候要特別留心，一旦出現氣泡，要將小室提起，去除氣泡，再將小室放進培養板。
③ 培養細胞：常規培養12－48h（主要依癌細胞侵襲能力而定）。時間點的選擇除了要考慮到細胞細胞侵襲力外，處理因素對細胞數目的影響也不可忽視。
通過給細胞染色，可在鏡下計數細胞
① 用棉簽擦去基質膠和上室內的細胞
② 染色：常用的染色方法有結晶紫染色、臺肦藍染色、Giemsa染色、蘇木精染色、伊紅染色等。
依據膜孔徑選擇適合您實驗用途的*佳膜:
0.4um型：掃描電鏡；光鏡下活細胞的觀察；免疫化學染色
0.4um高密度（孔多）型：小分子的運輸，擴散和分泌；TEER檢測；藥物生物活性檢測
1.0um型：光鏡下活細胞的觀察，分子的運輸，擴散和分泌；免疫化學染色；藥物生物活性檢測
3.0um型：光鏡下觀察；掃描電鏡；大分子和病毒的運輸；細胞遷移
3.0um高密度型：大分子和病毒的運輸，分泌和擴散；細胞遷移
8.0um型：腫瘤侵襲；細胞遷移；趨化研究；腫瘤轉移