關鍵詞:細胞克隆形成實驗|實驗技術服務 簡介:世界**品牌細胞克隆形成實驗|實驗技術服務原裝**,質量保證,價格優惠。 細胞克隆形成實驗|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。 我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。 產品品牌:細胞克隆形成實驗|實驗技術服務 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html 測序實驗流程: 概念: 細胞克隆形成率即細胞接種存活率,表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數量。貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆,而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。 1.試劑與材料 (1)供融合用的脾細胞及骨髓瘤細胞。 (2)1640培養液100ml。 (3)完全1640液100ml。 (4)2.5%FCS-1640液50ml。 (5)HAT培養液100ml。 (6)50%PEG:取分子量4000,高純度的(日本進口或Serva)PEG10g放入25ml瓶中高壓滅菌,使用前用預熱于40℃的1640液10ml等量(W/V)混合,以酚紅檢查pH,一般不必調pH。如pH有改變,可用HCl或NaHCO3調整。 (7)10ml和50ml的滅菌沉淀管或瓶。 (8)40孔塑料培養盤。 2.操作方法 ⑴準備好脾細胞。 ⑵在50ml沉淀管中混合108脾細胞和107小鼠骨髓瘤細胞,并加入50ml2.5%FCS-1640液。 ⑶室溫400g離心3min,使細胞沉淀。 ⑷移去上清液。 ⑸輕敲管底部,使沉淀流動,把沉淀管放于40℃水浴中,使其達融合溫度。 ⑹加預熱至40℃的50%PEG0.8ml,用1ml吸管緩慢滴加,邊加邊搖沉淀管,肉眼觀察可見有顆粒出現,滴加過程要求持續2min。 ⑺加1ml1640液,邊加邊搖動,持續1min。 ⑻重復⑺一次。 ⑼加1ml1640液,邊加邊搖動,持續0.5min。 ⑽重復⑼一次。 ⑾加1640液15ml。 ⑿室溫,400g離心1min,使細胞沉淀。 ⒀去上清,輕敲管底部,加25ml含有HAT的完全1640液。 ⒁往已于前一日種有飼養細胞的40孔塑料培養盤中滴加融合的細胞液,每孔1滴(約0.05ml)。 ⒂輕搖后,放入5%CO2飽和濕度的37℃溫箱中培育。 ⒃第3、6、9、10日換入含HAT的完全1640培養液。注意輕輕吸取上清液,勿將固定于孔底的細胞吸出,根據需要加入適量的飼養細胞。 ⒄于第12、15日加入含有HAT的完全1640培養液。在每次換液前用倒置顯微鏡觀察,大約在10天左右就可觀察到雜交瘤細胞生長出來。大多數雜交瘤細胞在10~20天內出現,但也有在1個月左右才能出現的。雜交瘤細胞出現后,吸取上清液,檢查抗體。 ⒅對繼續生長的雜交瘤細胞進行增殖傳代。在傳代過程中,依情況取消HAT液和完全1640液而代之以10%FCS-1640液。同時保存于液氮和進行克隆化,在這期間每代都要檢查抗體,以防止產生抗體細胞的變異和丟失。 主要特性: ①蛋白質的精細結構; ②淋巴細胞亞群的表面新抗原; ③組織相容性抗原; ④激素和藥物的放射免疫(或酶免疫)分析; ⑤腫瘤的定位和分類; ⑥純化微生物和寄生蟲抗原; ⑦免疫治療和與藥物結合的免疫-化學療法 。上一篇:細胞劃痕實驗(Wound Healing)技術服務|實驗技術服務下一篇:細胞克隆形成實驗服務|實驗技術服務
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