關鍵詞:SRB技術服務|實驗技術服務
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SRB技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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產品品牌：SRB技術服務|實驗技術服務   http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序實驗流程：
1.SRB檢測方法的原理
磺酰羅丹明B(Sulforhodamine B，SRB)比色法，主要用來檢測細胞增殖情況。SRB是一種粉紅色陰離子染料，易溶于水，在酸性條件下可特異性地與細胞內組成蛋白質的堿性氨基酸結合;在540 nm波長下產生吸收峰，吸光值與細胞量成線性正相關，故可用作細胞數的定量檢測。SRB染色后不會像MTT法那樣很容易變色，細胞固定染色后在96孔板中可以放置較長時間，因而受測定時間的影響較小。用Tris-base溶液溶解的SRB也可穩定較長時間。因此不同時間點固定的96孔細胞培養板可在同一時間測定，測定的吸光值結果不會受到明顯影響。吸光值與SRB濃度作圖時，在OD單位1.5-2.0以下為線性，當超出線形范圍時，*好稀釋后重新讀數。雖然SRB法比其他檢測方法操作步驟繁瑣，但是由于時間可以自己掌握，不受限制，因此適用于高通量篩選。
2.SRB檢測的操作步驟
1)細胞固定:藥物作用時間終點時，每孔加入50μL4℃預冷的TCA溶液(30%，w/v)固定細胞，TCA溶液的終濃度為10%。靜置5 min移入4℃冰箱中固定1 h，取出用去離子水沖洗5遍，室溫晾干。
2)染色:待96孔板室溫下晾干后，每孔加入0.4%(w/v)的SRB染液(1%的乙酸配制)70μL，染色30 min后倒掉染液，用1%(v/v)乙酸沖洗4次，去除未結合的染料，室溫晾干。
3)檢測:用100μL非緩沖Tris-base堿液(10mM，pH=10.5)溶解與細胞蛋白結合的染料，水平搖床上振蕩20min，采用酶標儀540nm處測定光吸收值。操作中，應注意洗除染料時操作需迅速，避免用移液器吸取液體，防止動作過慢造成與細胞蛋白結合的染料解吸附。
3.SRB檢測的計算公式
根據美國國立癌癥研究所(National Cancer Institute，NCI)關于SRB檢測的介紹，細胞增殖百分率的計算存在以下兩種情況:1)Tx-T0>0，PG=100×(Tx-T0)/(C-T0)
2)Tx-T0<0，PG=100×(Tx-T0)/T0
其中，
T0:藥物作用前的細胞經過固定、染色后測得平均吸光值;
C:培養基中加有等體積的DMSO，沒有藥物作用的陰性對照的平均吸光值(陰性對照);
Tx:藥物作用終點時細胞經過固定、染色后測得平均吸光值。
PG即Percentage Growth，是指藥物作用的樣品孔與陰性對照孔中細胞增殖量的百分率。
1， 根據水樣中 SRB 的估計濃度，可以選擇一組合適數目的細菌瓶。首先將培養瓶排成 一組，并依次編上序號。 
2， 將細菌瓶的瓶塞保護膜揭去，并用 70%的乙醇溶液消毒。 
3， 按照準備工作的第 3 條操作后，用無菌注射器取 1ml 水樣，注入到一號瓶內，充分 震蕩。 
4， 用另一支無菌注射器從一號瓶內取 1ml 水樣，注入到二號瓶內，充分震蕩。 
5， 再更換一支無菌注射器，從二號瓶內取 1ml 水樣，注入到三號瓶內，充分震蕩。 
6， 依次類推，一直稀釋到*后一瓶為止。根據細菌含量確定稀釋瓶數，一般稀釋到 7 號瓶。 
7， 把上述測試瓶放入到恒溫培養箱中， 培養溫度控制在現場水溫正負 1℃范圍內，兩周 后讀數。 
實驗目的：檢測細胞增殖活力或檢測樣品對細胞體外增殖的影響
實驗原理：磺酰羅丹明是一種能與生物大分子的堿性氨基酸結合的水溶性蛋白染料，其結合于細胞中的量的多少可以反映總蛋白量進而反映細胞數的多少。在515nm波長處的OD值與活細胞數呈良好的線性
關系。
實驗材料： SRB（SIGMA），其它同MMT法
實驗內容與方法：
1.  細胞計數、稀釋細胞懸液，接種96孔細胞培養板，培養；
2.  加入含藥培養基，同時設立陰性、溶媒及陽性對照組，培養；
3.  SRB染色，測定；
4.  計數各組別抑制率及應用SPSS 17.0通過Bliss法計算IC50.